Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者方面缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到口内免疫性自由基到用到1型式乳癌临床症状的成果率在幼儿时期就有很好的刻画，多个口内免疫性自由基白血病的幼儿中所有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的幼儿这一数目增大到84%。相对于之下，占临床1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的发病程序还未得到适当的研究课题。

愈加多的人开始可用分期中系统来判别1型式乳癌的成果：形态在用到多种口内免疫性自由基时进入第1期中，用到血糖异常时进入第2期中，用到症状时进入第3期中。一些多发口内免疫性自由基白血病的形态，在1期和2期，成果较慢，并蓬勃发展为发病的1型式乳癌。我们之前刻画了一分组在首次验证到多种口内免疫性自由基样品后至极多10年无乳癌的变慢成果者，这分组病患者总数极多，但外观上非常指明。随后，我们发现口内自身蛋白质依赖性CD8+T蛋白质质自由基在成果加速的病患者中所基本不发挥作用，但在近期发病和值得注意的乳癌病患者中所很容易验证到。这似乎说明了，与成果病患者相对于，这些病患者免疫性自由基的通气增强。

早期研究课题说明了，尽管通气性T蛋白质质(Treg)数量正常，但乳癌病患者发挥作用一些机能瑕疵，其中所包括对IL-2的自由基灵来生性增大。此外，乳癌病患者中所的effectCD4+T蛋白质质似乎对通气兼具抵抗性，表现为effectT蛋白质质的选择性逼近，自然产生的Treg和质外产生的诱导Treg，以及蛋白质亲身经历的CD4+T蛋白质质中所IL-2自由基逼近。本研究课题的目的是刻画了CD4+通气性T蛋白质质(Treg)在海岸边极加速成果者中所的外观上，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群系统化的交叉研究课题，在21岁以下确诊的病患者亲族中所检查1型式乳癌的危险考量。我们之前刻画了仍然加速成果者的外观上，他们保有多重口内免疫性自由基白血病有约10年，但未用到乳癌的临床症状，慢性或非透过性免疫性。随后，10名继续保有无乳癌并愿意提供大量血液样品的加速成果者划入T和B蛋白质质机能比对。在目前的研究课题中所，8名慢成果者(SP分组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的口内免疫性自由基白血病。所有的参加者都属于1型式乳癌成果的1期，尽管一些人随后失去了口内免疫性自由基对某些蛋白质的白血病自由基，然而，一名病患者已经属于2期至极多6年，但未用到临床症状，一名病患者被诊断为乳癌，该受试者72岁，在挖掘出实验样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中所对该小分子透过了原则上评估。分离外周血单个核蛋白质质(PBMCs)，采用多值流式蛋白质质妖术和T蛋白质质选择性试验评估小分子中所Treg的阈值、表观和机能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和回归)透过无委派聚类比对，评估Treg表观。

结果：与生活品质小分子相对于，来自慢成果质的遗忘CD4+T蛋白质质的委派聚类看出，介导的遗忘CD4+ Treg阈值增大，与利尿剂诱导的TNFR相关蛋白质(GITR)强调增大有关。一名HbA1c增大的病患者与成果加速者和最简单的对应分组相对于，Treg谱有所区别。机能比对说明了，与生活品质小分子相对于，来自加速成果质的Treg介导的CD4+effectT蛋白质质选择性轻微受损。表现为对effectCD4+T蛋白质质CD25和CD134强调的选择性增大。

所示1 险恶的表观比对看出，CD4+Treg亚型式在慢成果表头中所增大。由FlowSOM填充的Treg过道，聚集在来自所有小分子的来生CD4+CD45RA -蛋白质质上。根据标识物强调核对出10个元簇:遗忘T蛋白质质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白质质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个节点代表一个战略性(100个战略性)，更是大的元战略性(10个元战略性)在节点分组周围着色。每个节点中所的饼所示说明单个标识的强调国际标准。(b)每个元聚类的热所示，以看出整质标识强调。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于总质量为每个metacluster木箱相所示(总质量> 0.05%)具质为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质质(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白质质(l)。粉红色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 可用CITRUS的预测证实，Treg阈值的增大是成果加速的标志。国际标准门控(a - f)和木瓜比对(g-k)比较SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T蛋白质质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个质的权威性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR强调透过分离，模拟FlowSOM个质。(b) HD(黑点)和SP(星点)分组以及小分子SP 606(粉红色)中所CD25+ cd127的阈值摘要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的木箱相所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头引人注意的簇被识别为SP和HD表头彼此间的不同。(j)木箱相所示看出了在SP(星点)和HD(灰点)分组中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于总质量(数目)。(k)直方所示看出每个簇的表观(粉红色)和Treg标识相对于强调与背景强调(橙色);上列，CPUTreg_3;示意所示即刻，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中所标识的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

所示3 与生活品质献血者相对于，成果加速者遗忘treg的GITR增大。每个遗忘CD4+T蛋白质质元簇(遗忘T蛋白质质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白质质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个强调标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的强调热所示(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(黄褐色)、所有SP(橙色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR强调串联，看出直方所示(c)和摘要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(粉红色)所有小分子包括，p< 0.05(橙色)小分子SP 606和最简单的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR强调，从国际标准门控，从所有HD(黄褐色)、所有SP(橙色)和SP 606(粉红色)串联，看出直方所示(e)和摘要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

所示4 来自加速成果的CD4+ treg蛋白质质依靠effectCD4+T蛋白质质的灵来生性增大。SP分组用橙色的线或和白点说明，HD分组用黄色的线或和白点说明，粉红色的线或/白点说明小分子sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质质透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按推论的数目滴定。用抗CD3 /28微珠来生化蛋白质质，培养出来3紧接著透过流式蛋白质质妖术验证。(a-d)与CD4+这样的话者相对于应的treg培养出来(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养出来。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE选择性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比率。可用白血病对应(介导的作出自由基蛋白质质不含treg)计算选择性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 effectCD4+T蛋白质质对加速成果的T蛋白质质来生化的选择性更是敏感。SP分组用橙色的线或和白点说明，HD分组用黄色的线或和白点说明，粉红色的线或/白点说明小分子sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质质透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按推论的数目滴定。用抗CD3 /28微珠来生化蛋白质质，培养出来3紧接著透过流式蛋白质质妖术(CD25反染)和蛋白质质因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者都由培养出来。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE选择性前年(b)。(c,d) CD25选择性前年(c)和CD134选择性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中所的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们得出结论的论据是，来自加速成果子的来生化遗忘CD4+Treg在GITR强调中所得到了扩张和丰富多彩，强调了进一步研究课题Treg在1型式乳癌风险形态中所的表型式的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28